История фильма является приквелом к компьютерной игре Assassin's Creed ll. Сюжет фильма сфокусирован на отце центрального персонажа Assassin's Creed II, Джиованни Аудиторе ди Фирензе (Giovanni Auditore de Firenze). Джиованни - ассасин, живущий во время Ренессанса в XV веке в Италии. На заре новой эры, одна коррумпированная семья готовит заговор с целью свержения могущественной семьи Медичи и уничтожении единой Италии.